一、样品前处理

1、所用试剂

1、1  浓盐酸，优级纯

1、2  6mol/L 盐酸：浓盐酸与水1:1混合

1、3  水：去离子水

1、4  苯酚：须重蒸

1、5  19种氨基酸标准品

2、标样配置

•  氨基酸混合标准储备液：含有天冬氨酸、苏氨酸等17种常见组成蛋白质的氨基酸。
  

•    牛磺酸标准储备液：用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。

•    正亮氨酸标准储备液：用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。

•    璜基丙氨酸标准储备液：用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。

• 蛋氨酸砜标准储备液：用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。

• 羟脯氨酸标准储备液：用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。

• 鸟氨酸标准储备液：用PH2.2的柠檬酸缓冲液配置成2.5umol/L的储备液备用。

将17种氨基酸混合标准储备液、牛磺酸、正亮氨酸、璜基丙氨酸、蛋氨酸砜、羟脯氨酸、鸟氨酸及PH2.2的柠檬酸缓冲液按照1:1:1:1:1:1:1:3配置成0.25umol/L的标准品待用。

3、前处理设备

1)     天平    

2)     水解管    

3)     量筒    

4)     无油真空泵    

5)     干浴水解、浓缩仪    

6)     移液管    

7)     0.45um滤膜    

4、样品制备（参考欧盟饲料指令98/64/EC ）

1、样品的准备

粉碎样品，通过0.5mm的筛孔。高水分的样品粉碎前必须低于50℃鼓风干燥或者冷冻干燥。高脂肪含量的样品粉碎前必须用轻质石油（3.12）脱脂。

2、氧化

从准备好的样品中称取约0.1~1克样品，准确到0.2mg，于100 ml带螺纹盖子的瓶子中，称取的样品应该含有大约10mg氮，水分不能超过100mg。将瓶子放于冰水浴中冷却至0℃，加5ml氧化试剂（过甲酸苯酚），用带弯头的玻璃刮勺混合。用空气密封膜将瓶子和刮勺一起密封，密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中，放置16小时。之后，从冰箱中取出，加0.84克偏重亚硫酸钠（3.4）来分解过量的氧化试剂。

3、水解

 加入25毫升盐酸-苯酚溶液, 然后将反应瓶放在烘箱中，温度控制在110摄氏度，旋松帽子（防止玻璃瓶子破裂），水解1小时。然后快速旋紧瓶塞（戴手套和护眼罩）将其继续在烘箱110摄氏度下水解23小时。

4、加入内标并且调节pH值到2.20

当水解反应结束后，将反应瓶从烘箱中取出，并且打开瓶口（戴手套和护目镜）。冷却后用定量加样器准确加入15.00克(15毫升)正亮氨酸标准溶液，混合并且转移水解溶液到250毫升的塑料烧杯中。加入大约125毫升柠檬酸缓冲液和19毫升氢氧化钠水溶液,将实验烧杯放入到样品容器中用氢氧化钠水溶液将溶液调节到pH为正好2.20。转移一部分溶液（不需要全部）到50毫升有盖子的塑料瓶中。可以马上测定或者放入冰箱等到分析的时候测定。

二、分析方法描述（Biochrom 30+）

氨基酸分析仪分析方法参数：

1)  色谱柱：Biochrom Na型阳离子交换树脂柱，4.6X20cm

2)  分离程序：

3)     运行时间：分析时间65min

4)     反应单元温度：135°C。

5)     检测波长：570nm、440nm同时检测。

附、鱼料分析图谱及做样结果